▍公司介紹

Arthus Biosystems（簡(jiǎn)稱(chēng)ArthusBio）是一家以免疫分析技術(shù)為驅(qū)動(dòng)力的美國(guó)生物技術(shù)企業(yè)，長(zhǎng)期深耕于甲基化生物學(xué)這一細(xì)分但極為關(guān)鍵的科研方向。公司的研發(fā)注意力始終集中在一條極其重要卻長(zhǎng)期被常規(guī)分子生物學(xué)工具"繞行"的通路上——即S-腺苷蛋氨酸（SAM）與S-腺苷同型半氨酸（SAH）所構(gòu)成的甲基化循環(huán)體系，以及與之耦合的酸-蛋氨酸代謝網(wǎng)絡(luò)。

在生命科學(xué)領(lǐng)域中，DNA甲基化、蛋白質(zhì)甲基化、脂質(zhì)和小分子甲基化修飾等過(guò)程幾乎參與了所有核心生理調(diào)控——從基因沉默到神經(jīng)遞質(zhì)合成，從細(xì)胞分裂分化到衰老與癌變。然而，SAM作為細(xì)胞內(nèi)主要的甲基供體、SAH作為其去甲基化副產(chǎn)物及強(qiáng)效甲基化抑制因子，由于兩者都是分子量極小、理化性質(zhì)活潑、在樣本中極不穩(wěn)定的代謝中間物，傳統(tǒng)生化檢測(cè)方法一直面臨"看得見(jiàn)但抓不住"的困境。

Arthus Biosystems選擇了一條難度更高但更具長(zhǎng)遠(yuǎn)價(jià)值的路徑：從小分子免疫原設(shè)計(jì)與抗體工程入手，構(gòu)建能夠特異性識(shí)別SAM與SAH的 monoclonal antibody（單克隆抗體）資源庫(kù)，并以此為基礎(chǔ)延伸出完整的免疫檢測(cè)產(chǎn)品矩陣——包括定量ELISA試劑盒、標(biāo)記偶聯(lián)物、標(biāo)準(zhǔn)品及配套試劑，使原本依賴(lài)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）等大型儀器平臺(tái)的甲基化代謝物檢測(cè)，得以在常規(guī)濕實(shí)驗(yàn)室的微孔板讀數(shù)儀上完成。

公司目前的產(chǎn)品生態(tài)覆蓋了從抗體原料→檢測(cè)試劑盒→熒光/酶標(biāo)偶聯(lián)衍生物→酶活分析工具的全鏈條，服務(wù)對(duì)象涵蓋高校科研院所、醫(yī)院研究中心、生物技術(shù)企業(yè)及制藥公司的研發(fā)管線，尤其在表觀遺傳學(xué)、代謝組學(xué)、疾病生物標(biāo)志物探索、營(yíng)養(yǎng)與衰老研究等領(lǐng)域形成了穩(wěn)定的學(xué)術(shù)用戶群。

?? 下圖為上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司作為美國(guó)Arthus Biosystems授權(quán)代理商的授權(quán)書(shū)

▍核心優(yōu)勢(shì)

1. 在小分子抗體開(kāi)發(fā)上的定向積累

SAM的分子量?jī)H為399.4 Da，SAH約為384.4 Da，二者都屬于典型的小分子半抗原（hapten），本身不具備獨(dú)立誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生高效價(jià)抗體的能力。Arthus Biosystems的核心技術(shù)工作之一，正是通過(guò)合理的載體蛋白偶聯(lián)策略（如BSA-SAM / BSA-SAH加合物的設(shè)計(jì)與合成），將SAM與SAH以保留其腺苷環(huán)、蛋氨酸骨架及硫酸陽(yáng)離子等關(guān)鍵識(shí)別表位的方式連接到大分子載體上，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)有效致敏，進(jìn)而篩選出具有所需結(jié)合特性的單克隆抗體克隆。

經(jīng)過(guò)交叉反應(yīng)驗(yàn)證，其抗SAM抗體對(duì)SAH、蛋氨酸（Met）、腺苷（Adenosine）、ATP、ADP及甲基thio腺苷（MTA）等結(jié)構(gòu)相近分子的識(shí)別信號(hào)處于極低水平，這意味著抗體對(duì)目標(biāo)分析物的選擇性經(jīng)過(guò)了系統(tǒng)化的排除測(cè)試，而非僅憑親和力曲線一紙結(jié)論。

2. 把"質(zhì)譜級(jí)問(wèn)題"帶入常規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作流

LC-MS/MS雖然精度出色，但在甲基化代謝物日常篩查場(chǎng)景中往往意味著：樣品前處理繁瑣、需要同位素內(nèi)標(biāo)、儀器機(jī)時(shí)緊張、數(shù)據(jù)分析門(mén)檻高、運(yùn)行成本持續(xù)累積。ArthusBio的ELISA體系給出的替代思路是——

以經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的免疫學(xué)特異性 + 酶標(biāo)顯色放大系統(tǒng)，換取對(duì)儀器依賴(lài)的大幅降低，同時(shí)把檢測(cè)通量提升到96孔板級(jí)別。

這并不是宣稱(chēng)免疫法在所有場(chǎng)景下都能取代質(zhì)譜，而是為大量"需要批量比較、需要縱向追蹤、需要預(yù)篩后再挑樣送質(zhì)譜"的研究環(huán)節(jié)，提供一個(gè)更順手的中間層工具。事實(shí)上，在許多已發(fā)表的關(guān)聯(lián)研究中，SAM/SAH的ELISA數(shù)據(jù)與質(zhì)譜結(jié)果呈現(xiàn)可對(duì)照的趨勢(shì)一致性，使其成為分層研究設(shè)計(jì)（screen → confirm）中的重要一環(huán)。

3. 產(chǎn)品矩陣的閉環(huán)設(shè)計(jì)

很多品牌只賣(mài)試劑盒，但ArthusBio同時(shí)提供：

層級(jí) 代表形態(tài) 用途

捕獲/檢測(cè)抗體 抗SAM mAb、抗SAH mAb（多克隆及單克隆） 自建免疫 Assay、Western/dot blot 改寫(xiě)、包被抗體篩選

現(xiàn)成定量平臺(tái) SAM ELISA kit / SAH ELISA kit（多版本） 直接跑樣本拿濃度

標(biāo)記偶聯(lián)試劑 HRP-anti-SAM、Alexa Fluor 647-anti-SAM、PE-anti-SAM、Biotin-SAM/SAH衍生物 流式、免疫熒光、定制化捕獲體系

功能酶活 MAT（硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶）活性檢測(cè)試劑盒 直接測(cè)"SAM生成能力"而非靜態(tài)濃度

這種從原料到完整檢測(cè)方案再到酶活功能讀數(shù)的縱深布局，使得用戶在同一個(gè)甲基化代謝主題下不必跨品牌拼湊試劑，減少了批次間差異引入的變量。

4. 針對(duì)樣本類(lèi)型的版本細(xì)分

同一款SAM ELISA并不是只做一個(gè)"通用版"了事，而是區(qū)分了：

• Standard版（IK00201）：面向常規(guī)提取物/勻漿型樣本

• 體液專(zhuān)用版（IK00201S，for plasma/serum）：在試劑配方與預(yù)處理緩沖體系上考慮了血漿中蛋白結(jié)合、抗凝劑干擾等因素

• Broad range版（IK00202/IK00203）：擴(kuò)展線性范圍，適配濃度跨度大的樣本集

• 細(xì)胞培養(yǎng)上清版（IK00204）：針對(duì)體外培養(yǎng)體系低濃度區(qū)間的變體

這種"按樣本基質(zhì)拆分"的產(chǎn)品邏輯，本身是對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)實(shí)問(wèn)題的回應(yīng)，而不是簡(jiǎn)單的SKU膨脹。

▍熱門(mén)產(chǎn)品介紹

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一、SAM（S-腺苷蛋氨酸）ELISA 檢測(cè)試劑盒

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▎品名

• S-腺苷蛋氨酸（SAM）ELISA檢測(cè)試劑盒 —— 通用版

• S-腺苷蛋氨酸（SAM）ELISA檢測(cè)試劑盒 —— 血漿/血清專(zhuān)用版

• S-腺苷蛋氨酸（SAM）ELISA檢測(cè)試劑盒 —— 寬量程版（96T / 48T可選）

• S-腺苷蛋氨酸（SAM）ELISA檢測(cè)試劑盒 —— 細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他樣本版

▎產(chǎn)品特點(diǎn)

• 基于抗SAM抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)性免疫吸附原理構(gòu)建，適配微量樣本即可完成定量

• 對(duì)SAM分子具有選擇性識(shí)別能力，交叉反應(yīng)經(jīng)測(cè)試后對(duì)SAH、Met、腺苷、ATP等近緣分子信號(hào)弱

• 提供預(yù)包被板（或包被抗體體系）、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋系列、檢測(cè)抗體-HRP（或階梯顯色體系）、底物液與終止液等全套組分

• 不同版本在標(biāo)準(zhǔn)曲線動(dòng)態(tài)范圍、低檢出下限、樣本預(yù)處理緩沖液配方上做了針對(duì)性調(diào)整——例如體液版強(qiáng)化了抗基質(zhì)干擾能力，寬量程版拉伸了線性段以適應(yīng)個(gè)體差異大的隊(duì)列

• 單次可完成96孔（含標(biāo)準(zhǔn)曲線孔與空白對(duì)照）的檢測(cè)排布，適合批次內(nèi)多樣本并行

▎存儲(chǔ)條件

• 未開(kāi)封試劑盒建議在 2–8 °C 條件下儲(chǔ)存（典型冷藏環(huán)境，不可冷凍抗體組分所在管）

• 標(biāo)準(zhǔn)品與酶標(biāo)抗體等蛋白類(lèi)組分對(duì)反復(fù)凍融敏感，應(yīng)遵循說(shuō)明書(shū)建議的分裝策略（若允許分裝）或單次取出后限定放回時(shí)限

• 底物液（如TMB類(lèi)）需避光保存；終止液多為酸性溶液，須與蛋白試劑分區(qū)存放

• 微孔板條拆封后未用完的板條應(yīng)密封回鋁箔袋并加干燥劑，防止包被表面失活

▎工作原理（以競(jìng)爭(zhēng)性/夾心混合邏輯簡(jiǎn)述）

SAM因?yàn)榉肿恿啃。?jīng)典處理方式之一是將SAM類(lèi)似物或SAM-載體固定相包被于孔壁，讓樣本中的游離SAM與標(biāo)記檢測(cè)探針競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)（競(jìng)爭(zhēng)性ELISA思路）；另一種是基于兩株識(shí)別不同表位的抗SAM抗體構(gòu)建夾心體系（若兩株表位不重疊且其中一株可用于固相捕獲、另一株用于檢測(cè)信號(hào)讀出）。ArthusBio的方案圍繞其核心抗SAM單抗的表位圖譜做了定制——

樣本中的天然SAM含量越高 → 與固相/探針上的SAM競(jìng)爭(zhēng)越充分 → 最終顯色信號(hào)越低（競(jìng)爭(zhēng)性情形）或信號(hào)隨濃度校準(zhǔn)（依具體版本設(shè)計(jì)而定）。通過(guò)SAM標(biāo)準(zhǔn)品的四參數(shù)或線性擬合曲線，將待測(cè)孔的OD值反算為濃度值（pmol/mL或nmol/L量級(jí)）。

關(guān)鍵點(diǎn)：這里的"競(jìng)爭(zhēng)"不是粗糙的占位游戲——抗SAM抗體的表位偏好是經(jīng)過(guò)篩選的，目的是讓抗體能分辨"完整的SAM陽(yáng)離子構(gòu)象"與"降解后的硫代/去甲基碎片"，從而在復(fù)雜生物提取液中維持可信度。

▎使用方法要點(diǎn)（通用流程框架）

1. 樣本采集與預(yù)處理：組織樣本一般需液氮速凍后按重量體積比用預(yù)冷緩沖液勻漿離心取上清；血漿/血清樣本需注意抗凝劑選擇（如EDTA血漿常見(jiàn)）并盡快分離避免SAM在室溫下降解；細(xì)胞培養(yǎng)上清可根據(jù)版本直接稀釋或經(jīng)超濾/萃取前處理。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：用試劑盒所附SAM標(biāo)準(zhǔn)品按指定倍比稀釋?zhuān)采w整個(gè)線性區(qū)間。每個(gè)板須帶自己的標(biāo)準(zhǔn)曲線（不可跨板套用）。

3. 加樣與孵育：按板布局加入標(biāo)準(zhǔn)品、空白、質(zhì)控（如有）和待測(cè)樣本，在指定溫度（常為室溫或37 °C類(lèi)條件）孵育指定時(shí)間，使競(jìng)爭(zhēng)/結(jié)合反應(yīng)達(dá)平衡。

4. 洗板：充分洗滌去除未結(jié)合分子——這一步是ELISA穩(wěn)定性的命脈，殘留物會(huì)造成背景漂移。

5. 檢測(cè)抗體/酶標(biāo)二抗孵育：加入HRP標(biāo)記的抗SAM檢測(cè)抗體（或試劑盒指定的檢測(cè)探針），二次孵育。

6. 底物顯色：加入TMB類(lèi)底物，在暗處反應(yīng)至顏色梯度肉眼可辨（通常數(shù)分鐘到十余分鐘量級(jí)），隨后以終止液終止。

7. 讀數(shù)：立即在酶標(biāo)儀上讀取 450 nm（有時(shí)參考620–650 nm扣除板底偏差），代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。

8. 結(jié)果校正：若樣本做過(guò)稀釋?zhuān)毘嘶叵♂尡稊?shù)；若勻漿組織需折算為 /mg蛋白 或 /g組織，建議平行做BCA蛋白定量或組織稱(chēng)重記錄。

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二、SAH（S-腺苷同型半氨酸）ELISA 檢測(cè)試劑盒

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▎品名

• S-腺苷同型半氨酸（SAH）ELISA檢測(cè)試劑盒 —— 通用版

• S-腺苷同型半氨酸（SAH）ELISA檢測(cè)試劑盒 —— 血漿/血清專(zhuān)用版

• S-腺苷同型半氨酸（SAH）ELISA檢測(cè)試劑盒 —— 寬量程版（96T / 48T可選）

▎產(chǎn)品特點(diǎn)

• 圍繞ArthusBio自產(chǎn)抗SAH單克隆抗體（如clone 301-1系等）構(gòu)建，能夠識(shí)別游離SAH分子

• SAH在生物樣本中同樣是低含量、易變的不穩(wěn)定代謝物，該試劑盒的設(shè)計(jì)重點(diǎn)之一是把"樣本穩(wěn)定性窗口"和"抗體結(jié)合窗口"之間的時(shí)間差管理好——即通過(guò)配方緩沖體系減緩SAH在體外分析前階段的進(jìn)一步水解/轉(zhuǎn)化

• 與SAM ELISA搭配使用時(shí)，可直接算出 甲基化指數(shù) = SAM/SAH（或SAM/(SAH+SAM)比例類(lèi)衍生指標(biāo)），這是甲基化活力評(píng)估中常用的比值參數(shù)之一

▎存儲(chǔ)條件

• 與SAM ELISA同類(lèi)要求：2–8 °C 冷藏為主，蛋白組分避反復(fù)凍融，底物避光，板條密封防潮

• SAH標(biāo)準(zhǔn)品母液穩(wěn)定性受pH和溫度影響明顯，應(yīng)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)規(guī)定的復(fù)溶后有效期執(zhí)行（多數(shù)情況下復(fù)溶后需短期使用或分裝凍存于適宜溫度）

▎工作原理

原理框架與SAM ELISA高度對(duì)稱(chēng)——利用抗SAH單抗對(duì)SAH分子的構(gòu)象選擇性，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性免疫結(jié)合或適配的夾心/間接捕獲方式，將溶液中SAH濃度轉(zhuǎn)化為可測(cè)量的顯色強(qiáng)度差值。由于SAH與SAM共享腺苷骨架但硫側(cè)鏈不同，ArthusBio的抗SAH抗體經(jīng)過(guò)交叉吸附與選擇性測(cè)試后，對(duì)SAM的串?dāng)_信號(hào)控制在較低范圍，使得同一份提取物先后跑SAM板和SAH板不至于互相"污染邏輯"。

▎使用方法要點(diǎn)（與SAM ELISA的共性+差異）

• 樣本前處理原則與SAM ELISA一致，但要注意：SAH在某些樣本中比SAM更穩(wěn)定，而在另一些樣本（如全血放置過(guò)久）中會(huì)隨時(shí)間的推移而變化，因此采血后快速冷卻分離血漿/血清的操作紀(jì)律對(duì)SAH尤為關(guān)鍵。

• 標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍通常設(shè)在低nmol/L到數(shù)μmol/L區(qū)間（視版本而定），空白孔OD不應(yīng)過(guò)低否則提示洗板過(guò)度或試劑失效。

• 計(jì)算時(shí)同樣要做稀釋倍數(shù)校正；當(dāng)目標(biāo)是甲基化指數(shù)時(shí)，SAM與SAH必須取自同一份樣本的同一次處理流程，不能拿不同天的兩次獨(dú)立提取數(shù)值強(qiáng)行配對(duì)。

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三、抗SAM單克隆抗體 / 抗SAH單克隆抗體（抗體原料）

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▎品名

• 小鼠抗S-腺苷蛋氨酸（SAM）單克隆抗體（Clone 118-6 等）

• 小鼠抗S-腺苷蛋氨酸（SAM）單克隆抗體（Clone 84-3 等）

• 兔抗S-腺苷蛋氨酸（SAM）多克隆抗體

• 小鼠抗S-腺苷同型半氨酸（SAH）單克隆抗體（Clone 301-1 等）

▎產(chǎn)品特點(diǎn)

• 針對(duì)極小分子半抗原的免疫原設(shè)計(jì)使得這些抗體在識(shí)別天然構(gòu)象態(tài)SAM/SAH方面有別于常規(guī)"只認(rèn)大蛋白"的抗體庫(kù)

• 單克隆株提供了批次間一致性?xún)?yōu)勢(shì)，適合需要方法學(xué)移植（比如把一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的SAM檢測(cè)流程轉(zhuǎn)移到另一實(shí)驗(yàn)室）的場(chǎng)景

• 可用于：自建改良ELISA、微孔板包被捕獲、免疫沉淀輔助富集（在特定緩沖條件下）、免疫斑點(diǎn)雜交（Dot Blot）層面的小分子可視化探索

▎存儲(chǔ)條件

• 濃縮抗體溶液通常建議 –20 °C 或 –80 °C 分裝保存（依具體產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)而定），避免反復(fù)凍融

• 含甘油的儲(chǔ)存緩沖液可在–20 °C保持液態(tài)不結(jié)晶，但若長(zhǎng)期穩(wěn)定優(yōu)先–80 °C

• 一旦分裝融化使用，短期（當(dāng)天或2–8 °C數(shù)天）可放冷藏，但不要把已回溫的使用中管再凍回去

▎工作原理

抗體分子中互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）與SAM/SAH的腺嘌呤環(huán)、核糖、硫鎓陽(yáng)離子（SAM的三價(jià)硫）或同型半氨酸硫醚鍵區(qū)域形成氫鍵/疏水/離子相互作用，對(duì)完整SAM分子的識(shí)別優(yōu)先級(jí)高于其代謝產(chǎn)物碎片。在免疫檢測(cè)語(yǔ)境里，這種選擇性就是"特異性"的物理基礎(chǔ)。

▎使用方法要點(diǎn)

• 包被濃度摸索：若是用戶自行包被到聚苯乙烯酶標(biāo)板上，需先用碳酸鹽包被緩沖液稀釋抗體至試驗(yàn)濃度（如1–5 μg/mL量級(jí)起步），4 °C過(guò)夜或37 °C短孵，次日封閉（常用BSA或脫脂奶粉）。

• 封閉是關(guān)鍵：未封閉的表面會(huì)非特異性吸附樣本中的SAM/SAH-結(jié)合蛋白（如甲基轉(zhuǎn)移酶、SAH水解酶碎片），導(dǎo)致背景偏高或回收率偏移。

• 一抗/二抗體系：若是多克隆兔抗SAM → 可用HRP-羊抗兔IgG作為顯色橋接；若是小鼠mAb且需要直接標(biāo)記，可考慮ArthusBio已經(jīng)提供的HRP/AF647/PE偶聯(lián)版本以省去二抗步驟。

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四、酶標(biāo)/熒光標(biāo)記偶聯(lián)物（HRP / Alexa Fluor 647 / PE 標(biāo)記抗SAM抗體）

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▎品名

• HRP（辣根過(guò)氧化物酶）標(biāo)記抗SAM單克隆抗體（Clone 118-6 等）

• HRP標(biāo)記抗SAM單克隆抗體（Clone 84-3 等）

• Alexa Fluor 647 標(biāo)記抗SAM單克隆抗體

• PE（藻紅蛋白）標(biāo)記抗SAM單克隆抗體

▎產(chǎn)品特點(diǎn)

• 這些屬于"即用型信號(hào)抗體"——廠家已完成偶聯(lián)反應(yīng)與純化，用戶省去了自行活化交聯(lián)劑、控制取代度（DOL）、去除游離染料的繁瑣與風(fēng)險(xiǎn)

• AF647與PE版本指向單細(xì)胞層面SAM關(guān)聯(lián)信號(hào)的探索思路（如固定透化后的胞內(nèi)流式方案），雖然SAM是小分子且部分池是可擴(kuò)散的，但在特定固定時(shí)機(jī)與透化條件下可保留一部分可檢測(cè)信號(hào)，適合機(jī)理探索階段

• HRP版本則直接對(duì)接ELISA/Dot Blot/ECL膜檢測(cè)等成熟平臺(tái)

▎存儲(chǔ)條件

• 標(biāo)記抗體對(duì)光（尤其熒光標(biāo)記）和溫度雙重敏感：避光 / 2–8 °C（短期）/ –20 °C分裝（長(zhǎng)期）

• 含蛋白酶的緩沖液環(huán)境會(huì)切割HRP或抗體，切忌直接把標(biāo)記抗體溶于未加酶抑制劑的細(xì)胞裂解液中長(zhǎng)時(shí)間存放

• 熒光標(biāo)記抗體每次取出后應(yīng)盡快放回，避免臺(tái)燈白光直射

▎工作原理

以HRP標(biāo)記為例：抗體仍負(fù)責(zé)選擇性錨oring to SAM（或SAM-加合物固定相），HRP則在加入底物（TMB/魯米諾類(lèi)等）后催化比色或化學(xué)發(fā)光信號(hào)，使"有無(wú)SAM"變成"有沒(méi)有顏色/光"。AF647/PE則是每一個(gè)抗體分子帶著若干個(gè)熒光團(tuán)，在流式或熒光成像系統(tǒng)中以光子計(jì)數(shù)而非酶促放大來(lái)報(bào)告。

▎使用方法要點(diǎn)

• 標(biāo)記抗體使用時(shí)稀釋比例是成敗旋鈕——過(guò)高則信號(hào)弱，過(guò)低則背景吞噬特異性。建議按說(shuō)明書(shū)給的推薦起跳稀釋?zhuān)ㄈ?:200~1:2000區(qū)間）做2倍梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)鎖定最佳點(diǎn)。

• 對(duì)于膜檢測(cè)（Dot Blot）：樣本點(diǎn)完后先干燥固定 → 封閉 → 稀釋標(biāo)記抗體孵育 → 洗 → 底物顯色（HRP）或直接成像（熒光）。

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五、MAT（硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶）活性檢測(cè)試劑盒

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▎品名

• 硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶（MAT）活性檢測(cè)試劑盒

▎產(chǎn)品特點(diǎn)

• 不直接測(cè)靜態(tài)SAM存量，而是測(cè)"你的系統(tǒng)還能不能以正常速率把蛋氨酸 + ATP → SAM"——即從功能酶活角度反映甲基供體供給能力

• 適用于肝組織（MAT活性最高的生理部位）、腫瘤細(xì)胞系、重組酶制劑的功能表征

• 將酶促反應(yīng)與下游SAM定量讀數(shù)耦合在流程內(nèi)，減少分步提取帶來(lái)的SAM降解損失

▎存儲(chǔ)條件

• 酶活類(lèi)試劑對(duì)溫度更挑剔：–20 °C或–80 °C凍存為常態(tài)，反應(yīng)緩沖液解凍后建議冰上放置，避免預(yù)溫導(dǎo)致底物自發(fā)水解

• ATP母液/底物儲(chǔ)液通常需分裝防反復(fù)凍融

▎工作原理

MAT催化：

L-蛋氨酸 + ATP → S-腺苷蛋氨酸（SAM）+ PPi + Pi

試劑盒通過(guò)提供優(yōu)化的底物體系讓MAT在可控溫育時(shí)間內(nèi)生成新SAM，然后借助SAM選擇性檢測(cè)組件（可以是抗體捕獲顯色或耦合酶讀的轉(zhuǎn)化鏈）將生成的SAM量轉(zhuǎn)換為信號(hào)值，再按反應(yīng)體積與時(shí)間歸算為 nmol/h/mg蛋白 等單位。

▎使用方法要點(diǎn)

1. 樣本制備（組織勻漿或細(xì)胞裂解）需在冷室/冰上完成，并盡快加入蛋白酶抑制劑體系，防止MAT在提取過(guò)程中失活或被蛋白酶切。

2. 蛋白定量（BCA法）必須同步做——酶活若不歸一化到蛋白質(zhì)量，后續(xù)組間差異可能只是"你這組提得蛋白多還是少"的假象。

3. 反應(yīng)啟動(dòng)靠加入ATP（或底物mix），需設(shè)零時(shí)對(duì)照（加底物前先停反應(yīng)）扣除背景SAM。

4. 反應(yīng)終止時(shí)機(jī)要在線性期之內(nèi)——建議先做時(shí)間曲線確認(rèn)"10–30分鐘內(nèi)產(chǎn)物累積仍然線性"的安全窗。

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六、SAM/SAH衍生偶聯(lián)物試劑（BSA-加合物 / 生物標(biāo)記等）

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▎品名

• BSA-SAM 偶聯(lián)物（用于包被/免疫原相關(guān)研究）

• BSA-SAH 偶聯(lián)物

• 生物標(biāo)記SAM衍生物

• 生物標(biāo)記SAH衍生物

▎產(chǎn)品特點(diǎn)

• 這些是半成品/原料級(jí)試劑，面向需要在自己平臺(tái)上搭建SAM/SAH親和捕獲、微陣列點(diǎn)樣、pull-down驗(yàn)證或抗體驗(yàn)證的用戶

• 生物標(biāo)記版本可通過(guò)鏈霉親和素/中性親和素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)固相錨定或信號(hào)放大

▎存儲(chǔ)條件

• 凍干粉形態(tài)通常在 –20 °C 干燥避光保存；復(fù)溶后按說(shuō)明書(shū)建議的儲(chǔ)存期限使用（一般不主張復(fù)溶后長(zhǎng)期放冷藏超過(guò)數(shù)周不凍）

• 含生物的試劑要注意容器表面吸附損失——建議使用低吸附管

▍解決實(shí)驗(yàn)中哪些問(wèn)題

? 問(wèn)題一：「我想測(cè)SAM/SAH，但實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有LC-MS/MS」

這是最直接的痛點(diǎn)。ArthusBio的產(chǎn)品讓研究者用酶標(biāo)儀 + 冷藏試劑 + 常規(guī)移液技能就能拿到SAM與SAH的定量數(shù)據(jù)。對(duì)于大多數(shù)非代謝組學(xué)核心平臺(tái)型的課題組而言，這降低了進(jìn)入甲基化代謝物研究的門(mén)檻。

? 問(wèn)題二：「質(zhì)譜法太貴/機(jī)時(shí)排不上/前處理做的樣本在等機(jī)器期間降解了」

SAM和SAH在生物樣本中不穩(wěn)定是共識(shí)——從活體取材到蛋白沉淀到上機(jī)，每一步都在和時(shí)間賽跑。ELISA方案把"從樣本到讀數(shù)"的時(shí)間壓縮到了一個(gè)工作日內(nèi)可完成的節(jié)奏，且樣本可在變性/萃取后立即凍存待檢，大幅緩解"等儀器"帶來(lái)的降解焦慮。

? 問(wèn)題三：「我有上百例臨床隊(duì)列樣本或幾十批細(xì)胞干預(yù)組，需要一個(gè)能并行的高通量方案」

96孔板格式天然適配批量處理。SAM ELISA + SAH ELISA可以同一批樣本平行跑兩套板，出來(lái)之后直接計(jì)算甲基化指數(shù)做分組比較（病例 vs 對(duì)照、給藥 vs vehicle、敲除 vs WT等）。

? 問(wèn)題四：「我做的是機(jī)制——需要知道不只是SAM的量，還有MAT酶本身是否還干活」

這時(shí)MAT活性檢測(cè)試劑盒補(bǔ)上了靜態(tài)濃度看不到的維度：有些情形下總SAM沒(méi)掉多少，但MAT活性已經(jīng)在下降——這意味著甲基供體供給儲(chǔ)備正在被侵蝕。兩個(gè)數(shù)據(jù)疊加才更接近真相。

? 問(wèn)題五：「我想在細(xì)胞水平看SAM分布/變化，不想只停留在勻漿平均值」

此時(shí)可選AF647/PE標(biāo)記抗SAM抗體，嘗試固定透化后的免疫熒光顯微鏡或胞內(nèi)流式路線（需自行優(yōu)化固定時(shí)機(jī)與透化條件，并設(shè)好陰性對(duì)照——因?yàn)檫@屬于方法學(xué)探索而非標(biāo)準(zhǔn)化一步到位的產(chǎn)品保證項(xiàng)）。這給"代謝物→空間異質(zhì)性"搭了一座橋。

? 問(wèn)題六：「我的樣本中除了SAM/SAH，還有很多結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，會(huì)不會(huì)串信號(hào)？」

ArthusBio公開(kāi)的交叉反應(yīng)測(cè)試（對(duì)Met、腺苷、ATP、ADP、MTA等）給出了" trivial cross-reactivity"的結(jié)論框架，但負(fù)責(zé)任的說(shuō)法仍是：任何免疫法都應(yīng)當(dāng)對(duì)至少一部分樣本做質(zhì)譜對(duì)照驗(yàn)證，尤其是在第一次將該試劑盒用于一種全新樣本類(lèi)型時(shí)。工具的價(jià)值在于可用性和通量，而數(shù)據(jù)的解釋權(quán)始終在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的質(zhì)量上。

▍購(gòu)買(mǎi)此公司的產(chǎn)品——常見(jiàn)疑問(wèn)與解答

Q1．Arthus Biosystems的產(chǎn)品適合哪些物種的樣本？

A．目前已驗(yàn)證的應(yīng)用場(chǎng)景主要集中在哺乳動(dòng)物體系——人、小鼠、大鼠的血液/血漿/血清、肝臟及多種組織的勻漿、培養(yǎng)細(xì)胞裂解液/上清等。若拓展到其他物種（植物、微生物、昆蟲(chóng)等），因SAM/SAH代謝背景和樣本基質(zhì)差異較大，建議先以少量樣本做回收率/平行性（spiked recovery）測(cè)試確認(rèn)體系兼容性。

Q2．試劑盒收到后需要立刻使用嗎？保質(zhì)期怎么看？

A．未開(kāi)封 kits 一般在2–8 °C可穩(wěn)定到標(biāo)簽所示有效期。關(guān)鍵消耗品（標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后、酶標(biāo)抗體開(kāi)管后）的使用壽命以說(shuō)明書(shū)規(guī)定為準(zhǔn)。經(jīng)驗(yàn)做法是：收到后檢查包裝完整性→拍照留底→存入4 °C專(zhuān)用試劑架（不與酸堿共用）→在實(shí)驗(yàn)記錄本登記接收日期與批號(hào)。

Q3．血漿/血清選哪個(gè)版本？抗凝劑有影響嗎？

A．請(qǐng)優(yōu)先選用血漿/血清專(zhuān)用版（即品名中標(biāo)注for plasma/serum的版本），并在采樣前確定抗凝劑種類(lèi)（EDTA/肝素等）。不同抗凝劑會(huì)改變離子強(qiáng)度與某些蛋白結(jié)合態(tài)的分布，因此同一研究?jī)?nèi)的樣本應(yīng)統(tǒng)一抗凝劑和處理時(shí)間窗，不可混用后直接比絕對(duì)值。

Q4．組織樣本怎么準(zhǔn)備比較好？

A．推薦流程：動(dòng)物死后迅速取組織→液氮速凍→–80 °C存檔。當(dāng)天做則取凍塊在冷室預(yù)冷勻漿緩沖液中勻漿→4 °C離心取上清→（可選：蛋白定量+分裝凍存–80）。關(guān)鍵是全程冰上/冷室操作，因?yàn)镾AM/SAH在室溫下會(huì)逐漸水解或參與殘留酶活性反應(yīng)從而偏離體內(nèi)真實(shí)值。

Q5．ELISA出來(lái)的SAM濃度單位怎么理解？要換算什么？

A．標(biāo)準(zhǔn)曲線給出的通常是 pmol/mL（或nmol/L） 級(jí)別的線性讀數(shù)。如果你的原始樣本是組織勻漿，最終常需要?dú)w一化為 pmol/mg蛋白（除以平行做的BCA蛋白值）或 pmol/g組織（除以取樣重量/比重折算）。兩個(gè)不同歸一化方式不可混為一談，論文中須明確寫(xiě)明。

Q6．能不能用PBS直接稀釋樣本上樣？

A．不建議隨意改稀釋液。試劑盒的Sample Diluent緩沖液不是"普通PBS加了一點(diǎn)BSA"那么簡(jiǎn)單——它在離子強(qiáng)度、還原劑控制、螯合劑與pH緩沖容量上是為穩(wěn)定SAM/SAH分子并壓制非特異性結(jié)合而配的。擅自換緩沖可能導(dǎo)致回收率飄移。

Q7．板子洗不干凈怎么辦？或者背景太高？

A．洗是ELISA最關(guān)鍵的手工變量。檢查：①洗液是否為新鮮配制的1×（或按說(shuō)明書(shū)復(fù)溶的）無(wú)污染洗液；②洗板機(jī)管道是否堵（手動(dòng)洗則保證每次吸干到底但不劃傷孔壁）；③封閉是否遺漏或縮短；④底物是否過(guò)期或受微量金屬/氧化劑污染導(dǎo)致全板泛藍(lán)。遇到系統(tǒng)性高背景時(shí)，先跑一排不加樣本只跑緩沖液的孔來(lái)定位是試劑本底還是樣本臟。

Q8．測(cè)出來(lái)的SAM/SAH絕對(duì)值和文獻(xiàn)里的質(zhì)譜值差幾倍，正常嗎？

A．不同方法（免疫 vs 質(zhì)譜）、不同前處理方法（酸化淬滅 vs 有機(jī)沉淀 vs 即時(shí)蛋白沉淀）、不同采樣-冷凍間隔、不同組織部位的生理波動(dòng)，都可能造成數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)的差異。免疫法的核心價(jià)值在于組內(nèi)相對(duì)趨勢(shì)與批次內(nèi)精密度，因此研究設(shè)計(jì)應(yīng)側(cè)重"同法同比"（同一批試劑、同一人操作、同一次前處理規(guī)程），而非追求絕對(duì)值與另一篇論文的質(zhì)譜絕對(duì)值嚴(yán)絲合縫對(duì)齊。

Q9．抗體產(chǎn)品（抗SAM mAb等）能用來(lái)做Western Blot嗎？

A．需要區(qū)分：SAM是半抗原小分子，常規(guī)SDS-PAGE會(huì)把SAM從蛋白質(zhì)上加合物上解離（除非你檢測(cè)的是SAM-共價(jià)修飾蛋白本身且電泳在非還原條件下保留了某種加合狀態(tài)）。因此抗SAM抗體更多用于捕獲型檢測(cè)（ELISA/包被/親和）而非經(jīng)典的"跑膠轉(zhuǎn)膜看條帶"WB。若確有特殊目的（如檢測(cè)BSA-SAM加合物標(biāo)準(zhǔn)品跑膠后的信號(hào)），可與技術(shù)支持溝通方案可行性，但不建議默認(rèn)等同常規(guī)蛋白抗體用法。

Q10．標(biāo)記抗體（HRP/AF647/PE）能自己再標(biāo)記一遍嗎？

A．一般不建議。偶聯(lián)物的最佳DOL（染料/蛋白摩爾比）和殘余游離染料清除工藝會(huì)影響信噪比，二次標(biāo)記容易破壞已有活性或引入聚集。需要定制標(biāo)記時(shí)應(yīng)優(yōu)先考慮直接采購(gòu)廠家已驗(yàn)證的標(biāo)記版本。

Q11．運(yùn)輸過(guò)程中干冰化了/冰袋化了，試劑還能用嗎？

A．收到時(shí)先觀察：蛋白試劑管是否達(dá)到室溫、是否渾濁/沉淀/變色、底物液是否提前變藍(lán)（TMB自發(fā)氧化標(biāo)志）。若冷鏈中斷但所有管仍冷且外觀正常，可暫存4 °C并優(yōu)先跑一次標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)收——只用標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2、空白OD、最高濃度OD是否落在預(yù)期區(qū)間來(lái)判定，而不要憑感覺(jué)。若有任何疑慮，聯(lián)系供貨方提供技術(shù)支持與批號(hào)追溯。

Q12．MAT活性試劑盒的"零時(shí)對(duì)照"怎么做？

A．簡(jiǎn)單的做法：在一管預(yù)先加了樣本和冰上預(yù)冷的終止液（或先加三氯酸等蛋白變性劑）的平行管中加入底物mix → 立即再次終止/取出供后續(xù)SAM檢測(cè)。這管的信號(hào)代表體系中"已有的背景SAM"而非酶促新生的SAM，最終酶活值應(yīng)為（測(cè)試管 – 零時(shí)管）÷ 時(shí)間 ÷ 蛋白量。

Q13．試劑盒能用于臨床體外診斷嗎？

A．Arthus Biosystems的上述研究用試劑標(biāo)注為 For Research Use Only（僅限研究用途），不用于臨床診斷、治療決策或體外診斷用途。涉及人體樣本發(fā)表時(shí)，應(yīng)遵守所屬機(jī)構(gòu)的倫理審批與樣本知情同意規(guī)定。

Q14．如果我只想先試一個(gè)小批量，有沒(méi)有更小包裝？

A．部分品系提供48T版本（如SAM/SAH ELISA的48T broad range變體），適合方法摸索階段。確認(rèn)體系穩(wěn)定后再轉(zhuǎn)入96T常規(guī)批量化。具體現(xiàn)貨與交期以當(dāng)前庫(kù)存狀態(tài)為準(zhǔn)。

Q15．在哪里買(mǎi)？怎么確認(rèn)是原廠渠道？

A．在中國(guó)區(qū)域的采購(gòu)，可通過(guò) 上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司 作為授權(quán)代理渠道獲取Arthus Biosystems的產(chǎn)品。下單前可將所需品名/版本/大致用量告知對(duì)方，由其協(xié)助核對(duì)適配版本（例如你以為需要通用版但其實(shí)你的樣本是血漿，就應(yīng)切換為體液專(zhuān)用版），并同步確認(rèn)進(jìn)口運(yùn)輸與溫控交付的細(xì)節(jié)安排。

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更多產(chǎn)品信息，請(qǐng)聯(lián)系Arthus Biosystems授權(quán)代理商：上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

（注：本文內(nèi)容基于品牌公開(kāi)資料及行業(yè)常規(guī)信息整理，具體以品牌信息文檔為準(zhǔn)。）

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