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klentaq授權(quán)代理

簡(jiǎn)要描述:klentaq授權(quán)代理商:上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
關(guān)鍵詞:klentaq,klentaq上海代理,klentaq中國(guó)代理,klentaq北京代理,klentaq江蘇代理, klentaq廣東代理,KTS-01, 105, 100,DNA聚合酶、PCR聚合酶、高速Taq酶、熱啟動(dòng)DNA聚合酶、抗抑制劑PCR酶、長(zhǎng)片段高保真聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄PCR酶、PCR增強(qiáng)劑、PCR緩沖液、血液樣本PCR酶

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2026-06-03
  • 訪  問  量:7185

詳細(xì)介紹

品牌DNA Polymerase Technology供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合

一、公司介紹

Klentaq是一家聚焦于DNA聚合酶技術(shù)改良與PCR酶制劑研發(fā)的美國(guó)生物技術(shù)企業(yè),其工作圍繞一個(gè)看似樸素實(shí)則極其刁鉆的核心命題展開:如何讓耐熱DNA聚合酶在更復(fù)雜的條件、更長(zhǎng)的模板、更多干擾物質(zhì)的共存下,依然穩(wěn)定、準(zhǔn)確地完成DNA合成。

與許多走平臺(tái)化擴(kuò)張路線的生命科學(xué)公司不同,Klentaq選擇了一條更為"窄而深"的路徑——它的資源和技術(shù)積累幾乎全部?jī)A注于聚合酶本身的分子工程改造,而非向上下游無限延展。公司的技術(shù)根基與美國(guó)華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院Wayne M. Barnes教授的研究脈絡(luò)有著深厚的學(xué)術(shù)淵源,Barnes實(shí)驗(yàn)室在Taq酶截短體、長(zhǎng)片段高保真PCR酶系組合、抗抑制突變體等關(guān)鍵方向上的工作,構(gòu)成了Klentaq產(chǎn)品線中多條核心酶種的技術(shù)起點(diǎn)。

Klentaq的產(chǎn)品體系并不追求大而全的鋪陳感,而是沿著幾條清晰的酶工程邏輯線展開:

• 截短改良線(KlenTaq / Klentaq1 — 去除N端結(jié)構(gòu)域以提升保真性與熱穩(wěn)定性)

• 抗抑制突變線(Omni系列 — 通過定點(diǎn)突變賦予酶分子對(duì)血液、土壤、染料等抑制物的耐受力)

• 冷敏感突變線(Cesium系列 — 獲得無需抗體、無需化學(xué)修飾的"自動(dòng)熱啟動(dòng)"行為)

• 長(zhǎng)片段高保真酶系組合(LA體系 — 無外切酶活性的主延伸酶 + 微量校對(duì)酶協(xié)同的雙酶策略)

• 輔助試劑線(PCR Enhancer Cocktails / 專用緩沖液體系)

這些產(chǎn)品目前服務(wù)于分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究、臨床樣本核酸檢測(cè)、環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢驗(yàn)、法醫(yī)DNA分析等多個(gè)需要可靠核酸擴(kuò)增的實(shí)務(wù)場(chǎng)景。在中國(guó)市場(chǎng),上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司為其授權(quán)代理商,負(fù)責(zé)產(chǎn)品供應(yīng)與技術(shù)對(duì)接。


?? 下圖為上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)劑有限公司作為美國(guó)klentaq授權(quán)代理商的授權(quán)

klentaq授權(quán)代理

二、Brand DNA Polymerase Technology — Klentaq的技術(shù)邏輯到底在做什么

要理解Klentaq的"品牌DNA",需要先回到一個(gè)基本事實(shí)上:Taq DNA聚合酶雖然開啟了PCR時(shí)代,但它從來就不是一把酶。

野生型Taq酶有兩個(gè)讓每一個(gè)日常使用者都頭疼的內(nèi)在屬性:

1. 它帶有5′→3′外切酶活性(該結(jié)構(gòu)域位于Taq分子的N端),這會(huì)在某些實(shí)驗(yàn)情境下對(duì)DNA底物產(chǎn)生不期望的核酸外切降解效應(yīng),同時(shí)也與酶的保真性上限有關(guān);

2. 它對(duì)許多常見樣本基質(zhì)中的化學(xué)物質(zhì)高度敏感——肝素抗凝劑、血紅素衍生物、腐殖酸、酚類、某些食物提取物中的成分……這些物質(zhì)的存在會(huì)顯著降低酶活性或直接阻斷聚合反應(yīng),迫使實(shí)驗(yàn)人員必須先做繁瑣的核酸純化步驟。

Klentaq所做的事,本質(zhì)上就是用蛋白質(zhì)工程的手段,分別針對(duì)上述痛點(diǎn)做精準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)—功能干預(yù):

◇ 截短邏輯:KlenTaq1 —— Taq的"Klenow片段"方案

Klentaq1(也寫作KlenTaq1)本質(zhì)上是Taq DNA聚合酶的N端截短體——大約缺失了N端280個(gè)氨基酸(不同文獻(xiàn)中也可見?236、?289等相近位置的截短變體,統(tǒng)稱為KlenTaq / Stoffel fragment類截短體),去掉的是編碼5′→3′外切酶結(jié)構(gòu)域的那一段。

去掉這個(gè)結(jié)構(gòu)域之后,剩下來的C端部分保留了完整的DNA聚合活性與3′→5′方向合成能力,但不再具備5′→3′外切酶活性,分子量降至約62 kDa。帶來的連鎖效應(yīng)包括:

• 保真性相對(duì)野生型Taq有所提升(因?yàn)槿コ艘粋€(gè)可能干擾精確合成的結(jié)構(gòu)域);

• 熱穩(wěn)定性反而更好——截短后的酶在95℃下的半衰期長(zhǎng)于全長(zhǎng)Taq;

• 3′端合成產(chǎn)物帶有突出的單"A"堿基(與Taq一致),可用于TA克隆流程。

這是整個(gè)Klentaq品牌最底層的技術(shù)構(gòu)件,后續(xù)很多產(chǎn)品(包括LA體系和部分Omni/Cesium變體)都以KlenTaq1或其衍生形式為"主酶骨架"。

◇ 長(zhǎng)片段高保真邏輯:LA(Long & Accurate)雙酶體系

長(zhǎng)片段PCR在過去一直受限于一個(gè)核心矛盾:你需要一種能在高溫下長(zhǎng)期工作的延伸酶(耐熱),但你也需要糾錯(cuò)能力(校對(duì)活性),而常規(guī)的耐熱酶要么沒有3′→5′校對(duì)功能,要么校對(duì)酶單獨(dú)使用時(shí)過于"挑剔"而導(dǎo)致延伸停滯。

Barnes提出的LA方案走的不是"找一個(gè)萬能超級(jí)酶"的路線,而是把任務(wù)拆開:用大量無外切酶活性的KlenTaq1充當(dāng)高效率的"主延伸引擎"(major polymerase),再混入少量具有3′→5′外切酶校對(duì)活性的耐熱校對(duì)酶(minor proofreading enzyme),形成一個(gè)協(xié)同的混合酶體系。校對(duì)酶的作用頻率很低——?jiǎng)偤米銐蚣m正那些可能導(dǎo)致延伸不可逆終止的錯(cuò)配,又不至于過度切割引物或模板而影響產(chǎn)率。

這種"分工協(xié)作"的哲學(xué),使得Klentaq的LA系列產(chǎn)品能夠在合適的條件下擴(kuò)增至十余kb乃至更長(zhǎng)的目標(biāo)片段,同時(shí)保持比單獨(dú)使用Taq更好的序列準(zhǔn)確性。

◇ 抗抑制邏輯:Omni系列的三重突變改造

這是Klentaq在應(yīng)用端具辨識(shí)度的一條產(chǎn)品線。常規(guī)Taq(甚至不少工程化Taq)在面對(duì)含40%全血、肝素抗凝血漿、檸檬酸鹽處理樣本、腐殖質(zhì)豐富的土壤提取液、植物多酚提取物、糞便膽汁鹽、食品基質(zhì)等復(fù)雜背景時(shí),酶活性會(huì)被嚴(yán)重壓制。

Omni系列酶是在Taq / Klentaq1骨架上引入特定氨基酸位點(diǎn)的三重替換突變得到的變體,這些突變改變了酶分子表面與抑制劑相互作用的關(guān)鍵界面性質(zhì),使得酶對(duì)多種化學(xué)抑制物表現(xiàn)出明顯提升的容忍窗口。其結(jié)果不是讓抑制劑"消失",而是把可工作的抑制劑濃度上限推高了數(shù)倍,從而在很多場(chǎng)景下允許你直接用粗制樣本、裂解液、FTA卡打孔洗脫液等作為PCR模板——省掉或簡(jiǎn)化純化步驟。

◇ 自動(dòng)熱啟動(dòng)邏輯:Cesium(銫)冷敏感突變體

熱啟動(dòng)PCR的經(jīng)典實(shí)現(xiàn)方式有兩種——加抗Taq抗體、或用化學(xué)修飾封閉酶活——但兩者都需要額外的試劑組分或加熱激活步驟的精密把控。Klentaq的Cesium系列走了第三條路:對(duì)Klentaq1或Taq本身引入冷敏感(cold-sensitive)突變,使得酶在低溫(如冰上或4℃)條件下的正確折疊/組裝受到干擾而保持低活性狀態(tài),當(dāng)反應(yīng)體系升溫到典型變性與退火溫度區(qū)間后,酶恢復(fù)天然構(gòu)象與催化能力。

這意味著你配制反應(yīng)液時(shí)不需要額外考慮"抗體有沒有失效""化學(xué)封閉基團(tuán)是不是均勻分散",只要按常規(guī)流程操作即可獲得內(nèi)置的非特異性抑制效果——自動(dòng)熱啟動(dòng)。


三、核心優(yōu)勢(shì)

以下逐條展開,不做渲染,只看機(jī)制與可驗(yàn)證的行為特征:

① 酶分子層面的定向改造,而非配方層面的"堆料"

Klentaq的產(chǎn)品差異不靠往反應(yīng)里多加幾種助溶劑或未知添加劑來體現(xiàn);其核心差異來源于聚合酶蛋白本身的氨基酸序列被改寫了。這意味著性能提升是酶固有的,不隨緩沖液批次漂移而劇烈波動(dòng)(當(dāng)然配套緩沖體系仍然重要)。

② 抗抑制窗口拓寬,直接簡(jiǎn)化樣本前處理

Omni系列酶對(duì)血液(EDTA/檸檬酸鹽/肝素處理均可)、血清、血漿、尿液、土壤腐殖酸、植物多酚、糞便提取物、牛奶/奶酪/巧克力/海鮮/肉類基質(zhì)、乙醇沉淀殘留、GITC(異硫氰酸胍)殘留、甚至某些染料的耐受能力,使得PCR可以從"必須先提純DNA"變成"可以直接用粗樣本或 minimally processed樣本做模板"。對(duì)于臨床快檢、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、大批量流行病學(xué)篩查來說,這一步流程壓縮的價(jià)值不在"酷",在"省力、省時(shí)、降低樣本損失率"。

③ 長(zhǎng)片段延伸能力與保真性的平衡

KlenTaq LA體系的設(shè)計(jì)思路讓"長(zhǎng)"和"準(zhǔn)"不必互相排斥——你不需要在長(zhǎng)片段擴(kuò)增時(shí)被迫選用保真性極低的單一Taq,也不需要為了保真性去忍受校對(duì)酶單獨(dú)工作時(shí)常見的產(chǎn)量驟降。混合酶策略把兩者的長(zhǎng)處做了取舍后的疊加。

④ 自動(dòng)熱啟動(dòng)降低操作門檻

Cesium冷敏感突變體提供的熱啟動(dòng)是"長(zhǎng)在酶上的",不依賴外加抗體或化學(xué)封閉試劑,反應(yīng)配制期間低溫非特異性合成被自然壓制,減少引物二聚體與錯(cuò)帶,同時(shí)不需要用戶記憶特殊的激活程序——常規(guī)的熱循環(huán)程序即可。

⑤ 產(chǎn)品矩陣的模塊性

Klentaq的產(chǎn)品不是一套"黑箱預(yù)混液讓你別問原理"的路數(shù),而是把酶、增強(qiáng)劑、緩沖液按功能拆開供應(yīng)——你可以按需選用KlenTaq1原酶做自己體系的定制調(diào)配,也可以用LA預(yù)混思路直接跑長(zhǎng)片段,還可以用Omni酶解決抑制問題,或用PEC(PCR Enhancer Cocktails)去"救"那些處于臨界狀態(tài)的困難模板。這種模塊化對(duì)方法開發(fā)者更友好。


四、熱門產(chǎn)品詳解

▎產(chǎn)品一:KlenTaq1 / HCY KlenTaq DNA聚合酶(5′→3′外切酶缺失型Taq截短體)

? 品名  

KlenTaq1 DNA聚合酶 / HCY KlenTaq DNA聚合酶(Klentaq產(chǎn)品線中的基礎(chǔ)截短型Taq聚合酶)

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

• 為Taq DNA聚合酶的N端截短形式(缺失約N端280個(gè)氨基酸對(duì)應(yīng)的5′→3′外切酶結(jié)構(gòu)域),分子量約62 kDa;

• 不含5′→3′外切酶活性,不含可檢出的內(nèi)切酶活性;

• 熱穩(wěn)定性優(yōu)于全長(zhǎng)野生型Taq——在典型PCR循環(huán)溫度下催化活性維持良好,95℃下的熱耐受時(shí)間窗口更寬;

• 合成產(chǎn)物3′-末端帶有單"A"突出,可用于TA克隆流程;

• 適配常規(guī)PCR與部分高保真場(chǎng)景的中短片段擴(kuò)增(一般適用范圍內(nèi)可作靈活調(diào)整,更長(zhǎng)片段建議移步LA體系);

• 與多種常規(guī)PCR緩沖液體系兼容,但為獲得最佳表現(xiàn),建議使用廠家配套的10×緩沖液方案或參照其推薦的Tris/硫酸銨/Mg2?體系框架自行優(yōu)化。

? 存儲(chǔ)條件

• 酶制品通常以儲(chǔ)存緩沖液(含甘油、穩(wěn)定劑、低鹽/Tris體系)的形式提供;

• 推薦-20℃保存,避免反復(fù)凍融;

• 短期操作時(shí)(如配制多板反應(yīng)的同一天上)可置于冰上,但不宜長(zhǎng)期在4℃存放;

• 若產(chǎn)品說明有指定"分裝后保存"的建議,應(yīng)照做——截短酶的濃度與保存狀態(tài)對(duì)反復(fù)凍融比全長(zhǎng)酶更敏感。

? 工作原理

KlenTaq1的核心工作原理與Taq一樣——以單鏈DNA為模板、以退火引物的3′-OH為起點(diǎn),沿5′→3′方向催化脫氧核苷三磷酸的聚合——但由于N端5′→3′外切酶結(jié)構(gòu)域的物理缺失,它不會(huì)對(duì)被延伸DNA的5′端鄰近區(qū)域產(chǎn)生外切降解,也不具備該結(jié)構(gòu)域帶來的某些干擾聚合精度的界面效應(yīng)。截短同時(shí)減小了酶的整體質(zhì)量與某些柔性區(qū)域的熵負(fù)擔(dān),使蛋白在高溫下的構(gòu)象維持更有韌性(即熱穩(wěn)定性提升)。

簡(jiǎn)單說:它做的事情和Taq一樣(合成DNA),但它的"手"少了一個(gè)可能添亂的結(jié)構(gòu)域。

? 使用方法(通用參考流程)

1. 反應(yīng)體系配制(冰上操作):

   • 10×配套KlenTaq緩沖液(典型框架:Tris-HCl pH~9.2 / 硫酸銨 / MgCl?體系)…… 1×

   • dNTPs …… 各200 μM(常規(guī))或按模板與預(yù)期產(chǎn)率微調(diào)

   • 正向引物 / 反向引物 …… 各0.1–0.5 μM(視引物Tm與設(shè)計(jì)而定)

   • 模板DNA …… 1–100 ng(質(zhì)粒)/ 10–200 ng(基因組,依復(fù)雜度調(diào)整)

   • KlenTaq1酶 …… 按廠家建議單位數(shù)添加(常見范圍為每25 μL反應(yīng)約0.5–2.5 U,具體依試劑濃度標(biāo)定而定)

   • 補(bǔ)水至總體積(常見為25 / 50 μL)

2. 循環(huán)條件(典型框架):

   • 初始變性:94–95℃ / 2–3 min

   • 變性:94–95℃ / 20–30 s

   • 退火:依引物Tm減3–5℃ / 20–40 s

   • 延伸:68–72℃ / 每kb約30–60 s(視模板與產(chǎn)物長(zhǎng)度調(diào)整)

   • 循環(huán)數(shù):25–35 cycles

   • 終延伸:72℃ / 5–10 min

3. 注意事項(xiàng):

   • Mg2?濃度對(duì)KlenTaq1的表現(xiàn)影響顯著——若你使用自定義緩沖液而非配套10×KLA類緩沖液,務(wù)必先做Mg2?梯度(1.0–3.5 mM范圍常見);

   • 若目標(biāo)片段偏長(zhǎng)(>3 kb),建議換用LA體系而非硬撐KlenTaq1單獨(dú)使用;

   • 模板中含有抑制物時(shí),KlenTaq1雖比野生Taq稍好,但仍不及Omni突變體的耐受窗口——此時(shí)應(yīng)考慮換酶或加PEC。

▎產(chǎn)品二:KlenTaq LA — Long & Accurate 長(zhǎng)片段高保真酶混合體系

? 品名  

KlenTaq LA DNA聚合酶混合體系(Long & Accurate PCR Enzyme Mix)

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

• 由大量無外切酶活性的KlenTaq1(主延伸酶) + 微量具3′→5′校對(duì)活性的耐熱校對(duì)酶(minor proofreading enzyme)組成;

• 設(shè)計(jì)目標(biāo):在保持較長(zhǎng)延伸距離能力的同時(shí),提升擴(kuò)增產(chǎn)物的序列準(zhǔn)確性;

• 對(duì)短片段同樣可用,但真正優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在較長(zhǎng)目標(biāo)(數(shù)kb至十余kb級(jí)別,依模板復(fù)雜度與體系優(yōu)化程度浮動(dòng));

• 酶混合物的協(xié)同機(jī)制意味著:你不必在"要長(zhǎng)"和"要準(zhǔn)"之間二選一;

• 適用性覆蓋基因克隆模板制備、基因組區(qū)段獲取、突變體構(gòu)建中的長(zhǎng)片段組裝底物準(zhǔn)備等。

? 存儲(chǔ)條件

• -20℃保存,避反復(fù)凍融;

• 含兩種酶蛋白組分的混合液,穩(wěn)定性受凍融次數(shù)影響——建議按常用反應(yīng)數(shù)分裝;

• 切勿長(zhǎng)時(shí)間置于4℃或室溫。

? 工作原理

LA體系的工作原理可以用一句話概括:主酶(KlenTaq1)負(fù)責(zé)高效率地往前走,副酶(校對(duì)酶)負(fù)責(zé)低頻率地"回頭糾偏"。

在長(zhǎng)鏈DNA延伸過程中,聚合酶偶爾會(huì)摻入一個(gè)錯(cuò)配堿基。如果什么都不做,下一個(gè)循環(huán)里這條錯(cuò)配鏈就可能成為模板,使錯(cuò)誤固定下來;更糟的是,錯(cuò)配造成的局部構(gòu)象異常有時(shí)會(huì)讓延伸本身提前終止——這正是長(zhǎng)片段PCR產(chǎn)率驟降的經(jīng)典原因之一。LA體系中微量的校對(duì)酶能以3′→5′外切酶活性識(shí)別并切除鏈端的錯(cuò)配核苷酸,之后KlenTaq1重新接手延伸。由于校對(duì)酶占比很低,它不會(huì)過度"啃食"正常配對(duì)的引物—模板接合處或產(chǎn)物的有效序列,因而在保真性增益與產(chǎn)量保持之間達(dá)成可行平衡。

? 使用方法(通用參考流程)

1. 反應(yīng)體系(冰上):

   • 10×LA緩沖液(廠家配套,內(nèi)含優(yōu)化濃度的Mg2?與輔助鹽)…… 1×

   • dNTPs …… 各200–250 μM

   • 引物 …… 各0.1–0.3 μM(長(zhǎng)片段可適當(dāng)降低引物濃度以減少非特異)

   • 模板 …… 基因組DNA 50–200 ng(或按模板復(fù)雜度增減)

   • KlenTaq LA酶混合液 …… 按廠家體積比添加(通常每25 μL加0.5–1 μL量級(jí),以說明書標(biāo)定的"X μL per 25 μL reaction"為準(zhǔn))

   • 補(bǔ)水至總體積

2. 循環(huán)條件(長(zhǎng)片段導(dǎo)向):

   • 初始變性:94–95℃ / 2–3 min

   • 變性:94–95℃ / 15–25 s

   • 退火:依引物Tm與GC含量定,通常58–63℃ / 20–40 s

   • 延伸:68–70℃ / 每kb 1.5–4 min(越長(zhǎng)越靠近上限;>10 kb建議3–4 min/kb起步,并視儀器溫控與管型熱傳導(dǎo)微調(diào))

   • 循環(huán)數(shù):25–30(長(zhǎng)片段不建議過高循環(huán)數(shù),以免積累非特異性與副反應(yīng))

   • 終延伸:72℃ / 10 min

3. 關(guān)鍵提示:

   • 長(zhǎng)片段PCR對(duì)模板質(zhì)量更敏感——DNA應(yīng)是完整度高、無酚/醇/鹽嚴(yán)重殘留的制備物;

   • 延伸時(shí)間是長(zhǎng)片段成敗旋鈕:寧可在時(shí)間上保守一點(diǎn),也不要用短延伸硬拉;

   • 若模板GC異常富集、形成穩(wěn)定二級(jí)結(jié)構(gòu),可加入PEC或調(diào)整DMSO/glycerol等助劑(但需注意與LA緩沖液的兼容性——優(yōu)先用廠家認(rèn)可方案)。

▎產(chǎn)品三:Omni Klentaq / Omni Klentaq 2 — 抗抑制PCR酶

? 品名  

Omni Klentaq DNA聚合酶 / Omni Klentaq 2 DNA聚合酶(Taq/KlenTaq1三重突變抗抑制變體)

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

• 在Taq或KlenTaq1骨架上引入特定位點(diǎn)的三重氨基酸替換,使酶分子對(duì)多種PCR抑制物的耐受窗口顯著拓寬;

• 文獻(xiàn)與應(yīng)用報(bào)告中標(biāo)明可在含有較高比例全血(例如處理至終濃度約40%血液的背景)的樣本中仍實(shí)現(xiàn)目標(biāo)擴(kuò)增;

• 對(duì)肝素、檸檬酸鹽、EDTA、膽汁鹽/腐殖酸、植物多酚、尿液基質(zhì)、土壤提取物、某些食品基質(zhì)的干擾成分均有更好的承受力;

• 適用于直接PCR / 粗樣本PCR的思路——從FTA卡打孔、血細(xì)胞裂解液、簡(jiǎn)易煮沸法提取物等材料中直接取少量作為模板;

• Omni Klentaq 2為同系列的進(jìn)一步迭代,通常在保持或提升抗抑制能力的同時(shí),對(duì)配合qPCR染料(如SYBR Green類)與某些熒光檢測(cè)格式的兼容性做進(jìn)一步優(yōu)化。

? 存儲(chǔ)條件

• -20℃保存,避免反復(fù)凍融;

• 儲(chǔ)存緩沖液中通常含甘油,保持低溫鏈完整;

• 操作期間短暫置冰即可。

? 工作原理

普通Taq酶的催化活性中心周圍有一系列表面殘基參與與DNA、dNTP、Mg2?及緩沖環(huán)境的相互作用。某些抑制物(如肝素帶強(qiáng)負(fù)電荷,可與Mg2?螯合或與酶表面正電區(qū)域結(jié)合)會(huì)干擾這些弱相互作用,使酶的有效構(gòu)formation偏移或使活性中心被屏蔽。Omni突變體的改造邏輯是在不破壞催化核心的前提下,調(diào)整酶分子表面那些"容易被抑制物劫持"的接觸面——結(jié)果是同樣的抑制物濃度下,酶仍能保持足夠比例的活性構(gòu)象來完成聚合。

它不是讓抑制物消失,而是讓酶在抑制物存在時(shí)不至于迅速跌出功能閾值。

? 使用方法(通用參考流程)

1. 反應(yīng)體系(冰上):

   • 10× Omni配套緩沖液 …… 1×

   • dNTPs …… 各200 μM

   • 引物 …… 各0.2–0.5 μM

   • 模板:粗樣本提取物 / 全血稀釋液 / FTA洗脫液——直接加1–5 μL(依樣本類型與抑制強(qiáng)度做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定體積上限)

   • Omni Klentaq酶 …… 按建議單位或體積添加

   • 可選:PCR Enhancer Cocktail (PEC) ——若抑制仍在臨界線上,加入適量PEC可進(jìn)一步拓寬成功率

   • 補(bǔ)水至總體積

2. 循環(huán)條件:

   • 初始變性:94–95℃ / 2–4 min(粗樣本可適當(dāng)延長(zhǎng)初始變性以充分破壞蛋白質(zhì)/釋放核酸)

   • 變性:94–95℃ / 20–30 s

   • 退火:依引物Tm / 52–60℃范圍(粗樣本中有時(shí)可略降低退火溫度補(bǔ)償模板雜質(zhì)影響,但需防非特異增加)

   • 延伸:68–72℃ / 每kb 30–60 s(抗抑制酶并不改變物理延伸速率,只是"能在臟環(huán)境里活下來")

   • 循環(huán)數(shù):30–40(粗樣本模板中目標(biāo)拷貝可能偏低,適度增加循環(huán)數(shù)是常規(guī)操作)

   • 終延伸:72℃ / 5–10 min

3. 關(guān)鍵提示:

   • 粗樣本做PCR時(shí),模板加入體積是最大的成敗變量——加太多抑制物會(huì)把任何酶壓垮,加太少則拷貝數(shù)不夠。建議做一次1–2–3–5 μL的體積梯度摸底;

   • 若你做的是qPCR熒光檢測(cè),確認(rèn)所用Omni版本與你的染料/探針格式兼容(Omni Klentaq 2通常對(duì)此有更好適配標(biāo)注);

   • 即使用了抗抑制酶,基本的樣本均一化(如統(tǒng)一稀釋到某一倍數(shù))仍有助于批間一致性。

▎產(chǎn)品四:Cesium Klentaq — 自動(dòng)熱啟動(dòng)冷敏感突變酶

? 品名  

Cesium Klentaq / Cesium Klentaq C / Cesium Klentaq AC(冷敏感突變型KlenTaq / Taq,自動(dòng)熱啟動(dòng)版本)

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

• 通過引入冷敏感(cold-sensitive)突變,使酶在低溫(冰上/4℃配制階段)的正確折疊不穩(wěn)定——活性被自然壓制;

• 當(dāng)反應(yīng)進(jìn)入常規(guī)PCR的熱循環(huán)溫度(特別是變性步驟的高溫區(qū)間)后,酶恢復(fù)天然構(gòu)象與催化活性;

• 不需要外加抗Taq抗體,不需要化學(xué)封閉試劑,不需要單獨(dú)的"激活步驟"——熱啟動(dòng)行為是酶自身的溫度依賴折疊特性提供的;

• 效果指向:減少冰上配制期間引物與模板的非特異性低溫配對(duì)所導(dǎo)致的"預(yù)熱前的微量合成",從而降低引物二聚體、錯(cuò)帶與非特異背景;

• 有Cesium Klentaq(不帶校對(duì))與Cesium Klentaq AC / CesiumTaq LA(結(jié)合校對(duì)/LA思路的冷敏感版本)等不同變體可供選擇,取決于你是否需要長(zhǎng)片段高保真能力疊加熱啟動(dòng)。

? 存儲(chǔ)條件

• -20℃保存,避免反復(fù)凍融;

• 冷敏感突變體的折疊對(duì)溫度歷史可能比野生型更敏感——取用后立即放回冰盒并歸位冷凍,不要留在臺(tái)面上;

• 不要預(yù)先將酶加入含模板與引物的全反應(yīng)液中后在4℃長(zhǎng)時(shí)間靜置(這就是它要壓制的情形——但在合理配制窗口內(nèi)<30 min通常是可控的),配好后盡快上機(jī)。

? 工作原理

常規(guī)Taq在冰上就有可觀的活性殘余——這意味著當(dāng)你把引物、模板、dNTP和酶混在一起放在冰上等離心機(jī)時(shí),引物可能已經(jīng)開始以非特異結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)低水平合成,這些"暗反應(yīng)"產(chǎn)物在后續(xù)循環(huán)中變成引物二聚體或非特異帶的種子。Cesium突變體的設(shè)計(jì)利用了蛋白質(zhì)折疊的溫度依賴性:特定位點(diǎn)突變使酶蛋白在低溫下無法穩(wěn)定維持催化構(gòu)象(或亞基組裝不完整),因此在冰上配制階段活性極低;一旦體系經(jīng)歷94–95℃變性高溫,蛋白折疊"復(fù)位",活性恢復(fù)。熱啟動(dòng)由此變?yōu)橐环N內(nèi)置于酶分子物理特性中的自動(dòng)行為。

? 使用方法

1. 反應(yīng)配制: 與常規(guī)KlenTaq / Taq PCR全一致——按你的習(xí)慣配25或50 μL體系,冰上操作,加酶后輕混、瞬離;

2. 上機(jī): 直接運(yùn)行常規(guī)程序即可——不需要在步驟列表里插入一個(gè)"95℃ × 15 min激活"的特殊指令(但初始變性本身的高溫就會(huì)完成構(gòu)象復(fù)位);

3. 循環(huán)條件: 與你所用的普通酶相同體系一致,不需要為Cesium額外修改;

4. 觀察收益的地方: 通常在凝膠上看到的是——引物二聚體條帶變暗/變細(xì),非特異的次要條帶減少或消失,主帶純度改善,尤其在你引物設(shè)計(jì)偏簡(jiǎn)并、模板復(fù)雜度高、或退火溫度不得不設(shè)得比較寬松時(shí)是如此。

▎產(chǎn)品五:OmniTaq2 — 兼具鏈置換與逆轉(zhuǎn)錄活性的快速酶

? 品名  

OmniTaq2 DNA聚合酶(多重活性快速延伸變體)

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

• 在Taq/KlenTaq類骨架上獲得的工程化變體,除DNA依賴的DNA聚合活性外,還表現(xiàn)出逆轉(zhuǎn)錄活性(以RNA為模板合成cDNA)與鏈置換活性;

• 延伸速度較傳統(tǒng)Taq酶顯著提升——文獻(xiàn)背景中提及其延伸速率可比傳統(tǒng)酶快約2–3倍(例如約1 kb/min級(jí)別的延伸能力,具體依模板與條件浮動(dòng));

• 上述特性的組合使其適配RT-PCR的一步法思路:可在同一管中完成逆轉(zhuǎn)錄與PCR擴(kuò)增,不必先做獨(dú)立的cDNA合成步驟;

• 對(duì)需要較快周轉(zhuǎn)的場(chǎng)景(病毒RNA檢測(cè)原型開發(fā)、快篩方法搭建等)有實(shí)用意義;

• 同時(shí)繼承了一定的抗抑制耐受特征(屬于Omni譜系衍生的屬性)。

? 存儲(chǔ)條件

• -20℃保存,避免反復(fù)凍融;

• 含逆轉(zhuǎn)錄活性意味著其對(duì)某些儲(chǔ)存環(huán)境變化可能比純DNA聚合酶更敏感——嚴(yán)格按分裝規(guī)范操作。

? 工作原理

OmniTaq2的核心在于其活性中心經(jīng)過改造后可接受RNA:DNA雜交鏈為底物(逆轉(zhuǎn)錄模式),同時(shí)在遇到下游已配對(duì)雙鏈區(qū)時(shí)能以5′→3′聚合伴隨的空間推進(jìn)力實(shí)現(xiàn)鏈置換(而非要求該雙鏈區(qū)先熔解開再延伸)。在一管反應(yīng)中,升溫程序先從較低溫段(逆轉(zhuǎn)錄適宜區(qū)間,約50–55℃)開始,酶以RNA模板合成cDNA第一鏈;隨后進(jìn)入常規(guī)PCR高溫循環(huán)段,同一酶轉(zhuǎn)為以DNA為模板的標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增模式。兩步合并為一個(gè)連續(xù)的熱循環(huán)程序。省掉的不是酶,而是"打開另一支管、加另一套緩沖液、轉(zhuǎn)移上清"的手動(dòng)步驟。

? 使用方法(一步法RT-PCR框架參考)

1. 反應(yīng)體系(冰上,RNA樣品最后加/與酶分開加以防過早接觸):

   • 10×配套緩沖液 …… 1×

   • dNTPs …… 各200–500 μM(依體系標(biāo)定)

   • 下游引物(也可含上游引物,依一步法引物設(shè)計(jì)策略)…… 各0.2–0.5 μM

   • RNA模板 …… 1–500 ng總RNA / 或按拷貝估算加體積

   • OmniTaq2酶 …… 按建議體積添加

   • 補(bǔ)水至總體積

   • 注意:RNA模板與含酶組分的混合時(shí)機(jī)應(yīng)遵循標(biāo)準(zhǔn)RNase防控習(xí)慣(DEPC水處理器具、戴手套、分裝tips)

2. 循環(huán)程序(一步法連續(xù)程序):

   • 逆轉(zhuǎn)錄段:50–55℃ / 10–20 min(合成cDNA第一鏈)

   • 初始變性:94–95℃ / 2–3 min

   • PCR循環(huán):

     ? 變性:94–95℃ / 15–20 s

     ? 退火:依引物 / 55–60℃ / 20–30 s

     ? 延伸:68–72℃ / 每kb約30–45 s(快速延伸的優(yōu)勢(shì)在這里體現(xiàn)為:即使目標(biāo)1–2 kb,延伸也可設(shè)較短)

   • 循環(huán)數(shù):30–35

   • 終延伸:72℃ / 5 min

3. 關(guān)鍵提示:

   • RNA模板中的抑制物(如TRIzol殘留、酚、乙醇)對(duì)逆轉(zhuǎn)錄活性的殺傷比對(duì)DNA模板PCR更直接——確保RNA清洗步驟充分、溶于無RNase水中;

   • 若目標(biāo)為病毒RNA且拷貝可能很低,仍需考慮引物/探針設(shè)計(jì)與內(nèi)參控制,酶只是工具鏈中的一環(huán)。

▎產(chǎn)品六:PCR Enhancer Cocktails(PEC)——非甜菜堿型增強(qiáng)劑體系

? 品名  

PCR Enhancer Cocktails(PEC,PCR增強(qiáng)劑雞尾酒)

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

• 非甜菜堿類的復(fù)合增強(qiáng)劑配方,設(shè)計(jì)為與抑制性模板或困難模板配合使用;

• 可用于Klentaq自有酶體系,也與多種市售DNA聚合酶兼容(作為輔助添加試劑角色);

• 作用邏輯偏向"改善模板可及性與酶工作環(huán)境"而非改變酶本身——對(duì)GC富集區(qū)、含二級(jí)結(jié)構(gòu)的困難模板、帶殘留抑制物的粗提模板有輔助提升效果;

• 通常以小體積加入反應(yīng)體系(按說明書建議的百分比或μL數(shù)),不改變你原有體系的主體架構(gòu)。

? 存儲(chǔ)條件

• 多數(shù)為室溫穩(wěn)定或4℃保存(具體以所附說明書為準(zhǔn));

• 避免污染與蒸發(fā)濃縮。

? 工作原理

困難PCR的瓶頸往往不止一個(gè):模板本身的二級(jí)結(jié)構(gòu)使局部區(qū)域難以變性解鏈、抑制物占據(jù)Mg2?或吸附于酶表面、dNTP與Mg2?的比例偏離優(yōu)區(qū)間……PEC的思路是用一組經(jīng)過篩選的助劑(可包括特定的多胺、非離子去污劑、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)組分等組合)來柔化這些邊緣效應(yīng)——它們不參與催化本身,但通過穩(wěn)定酶構(gòu)象、輔助模板鏈分離、鈍化部分抑制界面的方式,把反應(yīng)整體拉回"可擴(kuò)增窗口"內(nèi)。

? 使用方法

• 在原有反應(yīng)體系中,按PEC說明建議的添加比例(如每25 μL反應(yīng)中加X μL PEC,或終濃度Y%)直接混入;

• 通常不需要重新計(jì)算dNTP/Mg2?的大幅調(diào)整,但如果你發(fā)現(xiàn)加入PEC后體系變得"太黏"或背景升高,可微調(diào)Mg2?±0.5 mM觀察趨勢(shì);

• PEC與Omni抗抑制酶搭配時(shí)效果往往疊加——前者擴(kuò)寬酶存活窗口、后者輔助模板可及性,兩者共同作用于不同環(huán)節(jié)。


五、這些產(chǎn)品解決實(shí)驗(yàn)中的哪些問題

? 痛點(diǎn) ⒈|"我的模板不干凈,擴(kuò)增不出或陰陽性飄忽不定"

典型場(chǎng)景: 臨床全血/血漿/血清樣本;野外土壤/水樣;植物組織(多酚/多糖);糞便;食品基質(zhì)。傳統(tǒng)方案是"好好提DNA"——但提純步驟長(zhǎng)、損耗大、某些基質(zhì)根本提不到干凈產(chǎn)物。

解法路徑: Omni Klentaq / Omni Klentaq 2 +(可選)PEC。拓寬酶的抑制物耐受窗口,允許直接用粗制樣本、簡(jiǎn)單裂解液、FTA卡洗脫液作模板。不是全取消純化,而是把純化從"必須全"降格為"夠用就行",省步驟、降損耗、縮周期。

? 痛點(diǎn) ⒉|"長(zhǎng)片段擴(kuò)不出來/產(chǎn)率低/背景臟"

典型場(chǎng)景: 你想從基因組上拿一段5–10 kb甚至更長(zhǎng)的連續(xù)區(qū)段做克隆或測(cè)序驗(yàn)證,但常規(guī)Taq跑到2–3 kb就衰減殆盡,Pfu類高保真酶又產(chǎn)量慘淡。

解法路徑: KlenTaq LA體系。用"主延伸酶 + 微量校對(duì)酶"的分工模型,把長(zhǎng)鏈延伸的持續(xù)合成能力與錯(cuò)配糾偏分開處理,改善長(zhǎng)目標(biāo)的可得性與準(zhǔn)確性之間的折中。

? 痛點(diǎn) ⒊|"引物二聚體太重 / 非特異帶太多 / 明明該有一條帶卻出現(xiàn)一片草地"

典型場(chǎng)景: 引物設(shè)計(jì)空間受限(簡(jiǎn)并引物、保守區(qū)引物、多重?cái)U(kuò)增),或模板復(fù)雜度高,冰上配制期就開始暗反應(yīng)。

解法路徑: Cesium Klentaq系列。冷敏感突變體在配制階段自動(dòng)壓制酶活性,等效于熱啟動(dòng)但不依賴抗體/化學(xué)封閉,主帶純度通常可見改善。

? 痛點(diǎn) ⒋|"RT-PCR要做兩天,我想壓縮成一管走完"

典型場(chǎng)景: 病毒RNA檢測(cè)原型、基因表達(dá)初篩——你希望逆轉(zhuǎn)錄與擴(kuò)增在同一管內(nèi)閉環(huán)完成,減少開蓋次數(shù)與轉(zhuǎn)移誤差。

解法路徑: OmniTaq2的一步法RT-PCR框架。利用該酶的逆轉(zhuǎn)錄活性 + 鏈置換 + 快速延伸的組合屬性,連續(xù)程序中完成cDNA合成與擴(kuò)增。

? 痛點(diǎn) ⒌|"模板GC太高/有強(qiáng)二級(jí)結(jié)構(gòu)/處于可擴(kuò)與不可擴(kuò)的臨界狀態(tài)"

典型場(chǎng)景: 某些微生物基因組的高GC區(qū)段、重復(fù)序列周邊、富含發(fā)夾的區(qū)域——體系優(yōu)化到極限附近仍時(shí)靈時(shí)不靈。

解法路徑: PEC增強(qiáng)劑雞尾酒作為輔助手段加入現(xiàn)有體系,或換用KlenTaq1/LA體系替代野生Taq以提升熱穩(wěn)定窗口與保真底子,再疊加PEC改善模板可及性。多管齊下而非賭單次變量。

? 痛點(diǎn) ⒍|"我需要一個(gè)可被我自己的緩沖體系和方法開發(fā)流程調(diào)用的'裸酶',而不是被鎖死在某一品牌預(yù)混液的黑箱里"

典型場(chǎng)景: 方法開發(fā)者、試劑盒研發(fā)人員、定制化檢測(cè)體系搭建者——你需要知道酶是什么、怎么工作、能與什么緩沖液框架配合。

解法路徑: Klentaq的供應(yīng)方式中包含了KlenTaq1原酶與配套緩沖液配方框架(如基于Tris/硫酸銨/Mg2?的10×體系),允許有經(jīng)驗(yàn)的用戶在已知物理化學(xué)參數(shù)范圍內(nèi)做二次開發(fā)與精細(xì)調(diào)控——這對(duì)研發(fā)端用戶是一個(gè)務(wù)實(shí)的優(yōu)勢(shì)。


六、購(gòu)買與使用中的常見疑問解答

以下整理了從方法開發(fā)者到采購(gòu)負(fù)責(zé)人最常提出的實(shí)際問題,逐條作答:

Q1|Klentaq的酶和普通商品化Taq有什么實(shí)質(zhì)區(qū)別,不只是宣傳語層面的?

答:最核心的區(qū)別在酶的"出身"。Klentaq1是Taq的N端截短體——它不是"加了什么神秘添加劑",而是聚合酶蛋白本身的氨基酸鏈被精確地少了一段(5′→3′外切酶結(jié)構(gòu)域所對(duì)應(yīng)的N端),這個(gè)改變帶來保真性改善與熱穩(wěn)定性的提升。Omni系列則是在此骨架上進(jìn)一步做了表面殘基的點(diǎn)突變,使酶對(duì)抑制物的耐受窗口上移。Cesium系列又在折疊行為層面做了冷敏感改造。你可以把它們理解為同一個(gè)催化家族里的不同工程化變體,各自針對(duì)不同的瓶頸環(huán)節(jié),而不是"換了個(gè)貼牌"。

Q2|如果我已經(jīng)在用某個(gè)主流品牌的Taq / Hot-Start Taq,換成Klentaq需要重新優(yōu)化整個(gè)體系嗎?

答:不一定需要"從頭再來",但也不能假設(shè)插進(jìn)去就能100%無縫。KlenTaq1的緩沖液偏好與野生Taq有共通之處(Tris/鹽/Mg2?框架),但Klentaq配套緩沖液的具體配方(如硫酸銨體系與pH設(shè)定)是為截短酶的理化特性調(diào)過的。穩(wěn)妥的做法是:第一輪先用廠家推薦的10×緩沖液與循環(huán)框架跑通,確認(rèn)產(chǎn)率與特異性符合預(yù)期后,再考慮逐步過渡到你自己慣用的緩沖液變量做微調(diào)。對(duì)于Omni系列,由于其抗抑制屬性與模板類型強(qiáng)相關(guān),更建議直接按說明書中針對(duì)"粗樣本"給出的體系框架做初次測(cè)試。

Q3|Omni酶真能做到"直接從40%血液中擴(kuò)增"嗎,是不是夸大了?

答:這里的"40%血液"指的是反應(yīng)體系中血液(或血液基質(zhì))所占的體積/濃度比例,且通常需要血液已經(jīng)過相應(yīng)抗凝處理(EDTA/檸檬酸鹽/肝素的處理方式不同,肝素是最刁鉆的抑制物之一,Omni的設(shè)計(jì)中對(duì)肝素耐受是重點(diǎn)之一)。它不等于"滴一滴未經(jīng)處理的指尖血進(jìn)反應(yīng)就能看見條帶"——樣本通常仍需做簡(jiǎn)單的溶血/裂解/離心取上清或FTA卡打孔的預(yù)處理。但相比野生Taq要求的"柱純化或磁珠純化至A260/A280",Omni可以把前處理壓縮到極簡(jiǎn)步驟。是否夠用取決于你對(duì)檢測(cè)限的要求與樣本中目標(biāo)拷貝數(shù)的實(shí)際水平。

Q4|KlenTaq LA能擴(kuò)多長(zhǎng)?有沒有一個(gè)保證的上限?

答:LA體系的設(shè)計(jì)目標(biāo)就是長(zhǎng)片段,文獻(xiàn)與產(chǎn)品引用中可看到數(shù)kb至十幾kb甚至更高的成功案例(依模板種類、GC、二級(jí)結(jié)構(gòu)、引物質(zhì)量、循環(huán)儀熱傳導(dǎo)性能而大幅浮動(dòng))。但它不是一個(gè)"給什么都能到42kb"的魔法管——影響長(zhǎng)片段成敗的前三名因素是:模板完整性>引物設(shè)計(jì)質(zhì)量>酶體系與延伸時(shí)間設(shè)置。如果你拿到LA酶后第一次跑8 kb沒出,先排查DNA提取得夠不夠完整(降解的DNA不會(huì)因?yàn)槟銚Q了酶突然變長(zhǎng)),再把延伸時(shí)間從1.5 min/kb逐步加至3–4 min/kb做梯度,通常能定位到真正的瓶頸在哪。

Q5|Cesium自動(dòng)熱啟動(dòng)能不能全替代抗體熱啟動(dòng)?我需要了解什么局限?

答:Cesium的冷敏感方案與抗體方案的"熱啟動(dòng)哲學(xué)"不同——一個(gè)是靠酶自身低溫折疊不穩(wěn)定來壓制活性,一個(gè)是靠抗體結(jié)合酶的表面來遮蓋活性中心。兩者都能減少冰上非特異性合成,但機(jī)制不同意味著表現(xiàn)特征也有差異:Cesium對(duì)"配制→上機(jī)的正常等待窗口"內(nèi)的泄露合成壓制是內(nèi)建的,但如果你刻意把配制好的全反應(yīng)在4℃放數(shù)小時(shí)不放,任何方案都不保證優(yōu)秀;抗體熱啟動(dòng)在某些極嚴(yán)苛體系中可能提供低溫封閉(但抗體本身是外源蛋白,有批間差異與額外成本)。務(wù)實(shí)地說:Cesium的優(yōu)勢(shì)在簡(jiǎn)便與自洽——不需要記"激活溫度是95℃×15min還是10min",直接按常規(guī)程序走即可。

Q6|我能不能把PEC增強(qiáng)劑和別的品牌的酶混用?

答:Klentaq的說明中提及PEC可與多數(shù)市售DNA聚合酶兼容,因?yàn)樗举|(zhì)是輔助環(huán)境改善劑而非依賴特定酶抗原表位的試劑。但實(shí)際效果取決于你要解決的到底是什么問題——如果瓶頸是酶本身對(duì)抑制物毫無耐受(比如某些精制的超高保真酶對(duì)血液殘留極度敏感),加PEC可能改善模板可及性但仍不足以彌補(bǔ)酶的抑制窗口缺口,這時(shí)更直接的方案是換用Omni類的抗抑制酶。如果你的體系瓶頸在GC二級(jí)結(jié)構(gòu),PEC作為疊加手段更對(duì)癥。

Q7|OmniTaq2做一步法RT-PCR,RNA模板的量怎么定?

答:與所有RT步驟一樣:關(guān)鍵不是"ng數(shù)好看",而是目標(biāo)轉(zhuǎn)錄本的相對(duì)豐度與完整度。總RNA可從1 ng到500 ng范圍做初試(依靶標(biāo)豐度調(diào)整),但若你的RNA制備物中有殘留的乙醇/胍鹽,逆轉(zhuǎn)錄活性會(huì)比DNA模板PCR更早掉下去——所以RT-PCR失敗時(shí)常犯的錯(cuò)是把鍋全推給酶,而真正原因是RNA清洗不夠。建議用一組已知豐度的positive control RNA(哪怕只是體外轉(zhuǎn)錄的一段片段)先跑通OmniTaq2的一步法程序,確認(rèn)信號(hào)動(dòng)態(tài)范圍后再上未知樣本。

Q8|這些酶的單位定義和Taq的"U"一樣嗎,我怎么換算用量?

答:Klentaq酶制品通常會(huì)標(biāo)明其標(biāo)定的活性單位定義(多以摻入活性測(cè)定為基準(zhǔn),如dNTP摻入一定nmol/h之類的標(biāo)準(zhǔn)生化測(cè)定框架)。在實(shí)操中,按該產(chǎn)品附頁(yè)建議的"每25 μL反應(yīng)加X μL酶儲(chǔ)存液"來操作是安全的,不要直接用你在別的品牌上習(xí)慣的"每管2.5 U"機(jī)械平移——因?yàn)閮?chǔ)存濃度、標(biāo)定體系、截短酶與全長(zhǎng)酶的表觀比活都可能不同。等你跑通體系后,可以再在自己設(shè)備上做梯度的酶量(0.5× / 1× / 1.5× / 2×)找出你實(shí)驗(yàn)室條件下的優(yōu)點(diǎn)。


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105

Klentaq-S

100 ul (2,000 X 25 ul rxns up to 1kb)

DNA Polymerase Technology

KTS-01

PAP (Pyrophosphorolysis-activated polymerization)

1000 U

DNA Polymerase Technology

100

Klentaq1

100 ul (2,000 X 25 ul rxns up to 1kb)

DNA Polymerase Technology

100-1ml

Klentaq1

1ml

DNA Polymerase Technology

E640

PCR Enhancer Cocktail Combo

1.25mleachenhancer

DNA Polymerase Technology

500

Enzyme Combo

variable

DNA Polymerase Technology

240

Cesium Klentaq AC

100 ul (2,000 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

350

Omni Klentaq LA

125 ul (500 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

340

Omni Klentaq

125 ul (500 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

324

5x ZipTaq PCR Kit

500x25ulrxns

DNA Polymerase Technology

GF340

Glycerol Free Omni Klentaq

1000 rxns

DNA Polymerase Technology

360

5x Omni Klentaq PCR Kit

500X25ulrxns

DNA Polymerase Technology

342

Omni Klentaq 2

125 ul (500 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

303

OmniTaq 3

125 ul (500 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

280

Cesium Klentaq C

100 ul(2,000 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

KlentaqS-20ul

Klentaq S,

20ul

DNA Polymerase Technology

110

Klentaq LA

100 ul (2,000 X 25 ul rxns up to 1kb)

DNA Polymerase Technology

HS303

Hot Start OmniTaq 3

125 ul (500 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

HS240

Hot Start Cesium Klentaq AC

100ul(2000x25ulrxns)

DNA Polymerase Technology

HS324

5x Hot Start ZipTaq Kit

500x25ulrxns

DNA Polymerase Technology

HS100

Hot Start Klentaq1

100 ul (2,000 X 25 ul rxns up to 1kb)

DNA Polymerase Technology

HS342

Hot Start Omni Klentaq 2

125 ul (500 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

E600

PCR Enhancer Cocktail 1 (for 500 rxns of 25 ul each)

6.25 ml

DNA Polymerase Technology

370

5x Omni Klentaq LA PCR Kit

500 X 25 ul rxns

DNA Polymerase Technology

302

OmniTaq2

125 ul (500 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

125

5x Klentaq-S PCR Kit

500x25ulrxns

DNA Polymerase Technology

344

Omni Klentaq 2 LA

125 ul (500 X 25 ul rxns)

DNA Polymerase Technology

322

5x OmniTaq 2 PCR/RT-PCR Kit

500 X 25 ul rxns

DNA Polymerase Technology

230

5x CesiumTaq LA PCR Kit

2,000 x 25 ul rxns

DNA Polymerase Technology

1001

Hot Start Klentaq1

100 ul

DNA Polymerase Technology






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